Auto DG Droplet Digital PCR system (전자동 미세방울 디지털 유전자 증폭기 시스템)

[예약 방법]
○ 공동기기센터로 방문 혹은 유선 예약 (031-881-7096, 7267)
○ 1 day 단위로 예약
○ Overnight 실험을 희망하시는 경우 공동기기센터로 문의 부탁드립니다.

[주의사항]
○ 기기교육 이수 후 사용 가능
○ 사용 단위는 96well의 1 Line (8 wells)기준으로, 8의 배수로 Sample 을 준비하셔야 합니다.

[준비물]
○ 96 well plate
○ Sample에 맞는 Supermix (EvaGreen-BR1864033 혹은 Probe-BR1863023)
○ Pierceable Foil Heat Seal

[기기 설명]
Bio-Rad QX200™ ddPCR은 microfluidics 기술과 water-oil emulsion droplet 기술을 융합한 시스템으로 Droplet generator는 각각의 시료를 20,000개의 균일한 나노리터 크기의 drop으로 나누고, 이 과정에서 핵산 분자는 각 droplet에 랜덤으로 분포합니다.
Droplet 형성을 완료한 후, PCR을 수행하면 20,000개의 각각의 droplet에서 독립적으로 증폭 반응이 진행되고, PCR 과정이 끝난 시료는 droplet reader를 통해 각 droplet의 형광 값을 검출합니다.
Droplet 내에 Target DNA 또는 RNA가 1 copy라도 존재한다면 그렇지 않은 droplet에 비해 높은 형광 값을 나타내게 되고, 이렇게 분석된 positive drop은 포아송 분포(Poisson distribution)에 의해 통계 처리되며, target의 농도가 자동으로 정량됩니다.

[구성 및 성능]
구성:
○ Automated Droplet Generator
○ PX1 PCR plate sealer
○ PTC Tempo Deepwell Thermal Cycler
○ QX200 Droplet Reader

성능:
○ Starting sample size: 20 µl
○ QX200 Droplet Generator capacity: 1~8 samples/cartridge
○ Droplets per 20 µl sample: 20,000
○ QX200 droplet reader capacity: 1~96 samples
○ Sample illumination: Light-emitting diodes
○ Sample detection: Multi-pixel photon counter
○ 검출 채널: FAM (EvaGreen), HEX (VIC)
○ Linear dynamic range: 5 orders of magnitude
○ Precision: ±10%
○ Droplets per 96-well plate: ~1.5 million